如何用酶标仪检测黄曲霉毒素B1

　　黄曲霉毒素B1属于自然 *强烈的致癌物质。 它一般产生于玉米，花生，巴西坚果和棉花种子中。 鉴于这种霉菌毒素的毒性，欧洲 做出了相近的限量，对黄曲霉毒素B1的限量为2ppb，对黄曲霉毒素总量的限量为4ppb。

　　使用酶标仪能够快速而准确的检测谷物，饲料和其他食品中的黄曲霉毒素B1。

　　检测原理

　　黄曲霉毒素B1检测试剂盒应用直接竞争酶联免疫吸附原理。

　　(1)样品提取液或黄曲霉B1标准品100ul与酶联偶合物200ul，混合后取100ul，

　　(2)加入到抗体包被的微孔中等待15分钟，

　　(3)洗板去除未参加抗原-抗体反应的黄曲霉毒素B1,

　　(4)酶的底物100ul加入到微孔中，等待5分钟，颜色变为蓝色，颜色的深浅与黄曲霉毒素B1的含量成反比，

　　(5)加入终止液100ul，颜色变为黄色，

　　检测步骤

　　1.取固体或液体样品5ml，加入25ml 70%的甲醇，混匀3分钟，静止10分钟，过滤，收集滤液，吸取100ul滤液加100ul分析缓冲液，混匀。

　　2.取出绿色的稀释孔和无色的有抗体包被的稀释孔各放入一个板架上。

　　3.吸取200ul酶联偶合物加入到绿色的稀释孔，再吸取100ul标样(0、2、5、20、50ppb)，和100ul步骤1的待检混合样，混匀3次。

　　4.然后从300ul混合物中吸取100ul加入到无色的有抗体包被的稀释孔中，静止15分钟。

　　5.将孔中的液体倒掉，用蒸馏水冲洗每个孔，将微孔倒置于纸巾上把水吸干。

　　6. 加入100ul底物，放置5分钟，颜色变为蓝色。

　　7. 加入100ul终止液，颜色变为黄色。

　　8. 上机检测，(酶标仪滤镜450nm，示差滤镜630nm)

　　9. 稀释倍数f：1

　　10. 定量限：生奶0.002ug/kg，

　　11. 牛奶或花生酱≤20ug/kg，合格，

　　12. 计算公式：X= c*f

　　注：

　　1. 酶联偶合物25ml ：sensitive conjugate 底物15ml ：substrate 终止液15ml ：stop solution 分析缓冲液 15ml ：assay buffer

　　2. 试剂盒在使用前恢复到室温(18~30度)，使用完毕后，放入2~8度冰箱冷藏

　　3. 标样中含有毒素，致癌性，使用时戴好橡胶手套、安全眼镜、工作服等防护装备

　　4. 在读数前，微孔中应没有气泡，否则影响分析结果

　　5. 标准曲线的相关系数 r ≥0.9850

　　6. 严格遵守规定的操作时间，否则导致数据不